¿Cómo recolectar y preservar muestras de sangre?

La sangre completa se divide en sangre no coagulada y anti-coagulada de acuerdo con las condiciones de recolección. Al mismo tiempo, el líquido amarillo superior que no ha sido separado por la anticoagulación se llama suero; El líquido amarillo superior que ha sido separado por la anticoagulación se llama plasma. La temperatura de almacenamiento y el tiempo de la muestra, y los pasos del método de la separación de suero, plasma y celular también son factores importantes que afectan los resultados de la prueba antes del análisis. Después de la recolección de sangre, las células sanguíneas deben consumir algunos nutrientes debido al metabolismo, por lo que al medir estos componentes, deben centrifugarse a tiempo para separar los componentes celulares. Preparaciones individuales antes de la recolección de sangre, como la duración del tiempo de ayuno, la determinación de la posición del paciente durante la recolección de sangre, etc.; tiempo de aplicación del torniquete, infusión, ejercicio, selección de anticoagulantes y estabilizador; El procesamiento de muestras afectará el nivel de algunos indicadores de detección. Por lo tanto, el proceso de recolección de muestras debe estandarizarse para reducir los errores preanalíticos.

1. No recolecte suero por anticoagulación:

1. Tubo de recolección de sangre sin aditivos rojos: utiliza el principio de coagulación de sangre natural para coagular la sangre, y el suero se precipita naturalmente y luego se centrifuga. Se utiliza principalmente para la bioquímica sérica (función hepática, función renal, enzimas miocárdicas, amilasa, etc.), electrolitos (potasio sérico, sodio, cloruro, calcio, fósforo, etc.), función de tiroides, prueba de fármaco, prueba de VIH, marcadores tumorales, Prueba de ciencia de inmunidad sérica.

2. Colección con tubos de coagulación: use tubos de coagulación azul. En general, se permite que se represente durante media hora a 1 hora, y el suero se centrifuge directamente para su uso o almacenamiento, y a menudo se usa en bioquímica de emergencia.

3. Recolección de tubos de recolección de sangre que contienen gel de separación y coagulante: la pared del tubo de recolección de sangre se siliconiza y recubre con un coagulante para acelerar la coagulación de la sangre y acortar el tiempo de detección. El gel de separación se agrega al tubo de mascota, y el gel de separación tiene una buena afinidad con el tubo de mascota, que de hecho actúa como una barrera. Normalmente, el gel de separación separa el componente líquido (suero) y el componente sólido (células sanguíneas) en la sangre incluso en una centrífuga ordinaria. La separación y la acumulación exhaustiva forman una barrera en el tubo de ensayo. Después de la centrifugación, no se producen gotas de aceite en el suero, se usan principalmente para la bioquímica sérica (función hepática, función renal, enzimas miocárdicas, amilasa, etc.), electrolitos (potasio sérico, sodio, cloruro, calcio, fósforo, etc.),,,, etc.), Función tiroidea, detección de fármacos, pruebas de SIDA, marcadores tumorales, inmunología sérica.

Ventajas del uso de tubos de coagulación:

1. Puede acelerar la coagulación de los glóbulos rojos; 2. Use el gel de separación para separar efectivamente el suero y evitar mejor la hemólisis;

Desventajas de coleccionar suero:

1. Los glóbulos rojos deben ser completamente coagulados, lo que lleva mucho tiempo; 2. El suero es relativamente pequeño, y 1 ml de sangre completa no está anticoagulado, y solo se pueden separar 0.2-0.3 ml de suero.

2. Recolección anticoagulante de plasma: la sangre completa anticoagulante se recoge, suavemente invertida, totalmente anticoagulante y el plasma se puede separar directamente por centrifugación para su uso o preservación.

De acuerdo con las características de rendimiento de diferentes anticoagulantes, se selecciona el anticoagulante apropiado. Los anticoagulantes comúnmente utilizados en el laboratorio son sal de heparina, tetraacetato de etilendiamina y citrato de sodio.

1, Anicoagulación de heparina: el anticoagulante más utilizado, en circunstancias normales, no interferirá con los indicadores relacionados, y la proporción de anticoagulación es grande (anticoagulación: sangre completa = 1:30), sin dilución de la sangre. La heparina es un mucopolisacárido que contiene un grupo de sulfato fuertemente cargado negativamente que mejora la inactivación de las serina proteasas por la antitrombina III, evitando así la formación de trombina y evitando varios efectos anticoagulantes, como la agregación de plaquetas. El efecto.

Los tubos de heparina generalmente se usan para la detección de cambios bioquímicos y hemorheológicos y son la mejor opción para la detección de electrolitos. La heparina sodio no debe usarse cuando se detectan iones de sodio en muestras de sangre para evitar afectar los resultados de la prueba. Tampoco se puede usar para el conteo y clasificación de leucocitos porque la heparina causa la agregación de leucocitos. Aunque no hubo diferencias significativas en las concentraciones de electrolitos obtenidas por anticoagulación con las tres sales de heparina, la heparina de litio se consideró la mejor. Esto se debe principalmente a que se cree que la heparina sodio aumenta el valor de sodio y la heparina amonio para aumentar el valor de amoníaco en sangre (medido por el método de ureasa). La heparina puede inhibir algunas enzimas de herramientas comúnmente utilizadas en la biología molecular, como las enzimas de restricción y las enzimas Taq, lo que afecta los resultados de los experimentos de PCR. Se pueden usar algunos métodos para eliminar el efecto inhibitorio de la heparina, como el uso de heparanasa o lavado con amortiguador 2 o más veces después de la leucaféresis. Sin embargo, muchos experimentistas todavía son reacios a usar la heparina como anticoagulante en los experimentos de biología molecular.

2, Anicoagulación de EDTA: el ácido tetraacético de etileno diamina es un ácido amino-policarboxílico, puede unir efectivamente los iones de calcio en la sangre. El calcio eliminará el calcio del sitio de reacción y evitará y terminará endógeno o exógeno. La fuente del proceso de coagulación sanguínea, evitando así la coagulación sanguínea, tiene menos efecto sobre la aglutinación de los glóbulos sangre y la morfología de los glóbulos sanguíneos que otros anticoagulantes, por lo que las sales de EDTA (2K, 3K, 2NA) se usan comúnmente como anticoagulantes. Se utiliza para la hematología general, pero no para la coagulación, los elementos traza y la PCR. Debido a que EDTA quelata los iones de metales pesados, algunas enzimas macromoleculares con iones metálicos tendrán una gran pérdida al usar este anticoagulante. Específicamente, según las métricas medidas por el cliente, era necesario usar EDTA para la anticoagulación.

3. Citrato de sodio: el citrato de sodio actúa como un anticoagulante actuando sobre iones de calcio en muestras de sangre. NCCLS recomienda una relación anticoagulante de 3.2% o 3.8% a la sangre. Es 1: 9 y se usa principalmente en el sistema fibrinolítico (tiempo de protrombina, tiempo de trombina, tiempo de tromboplastina parcial activado, fibrinógeno). Se debe prestar atención a la cantidad de sangre recolectada para garantizar la precisión de los resultados de la prueba, y la sangre debe invertirse suavemente y mezclarse de 5 a 8 veces inmediatamente después del muestreo. Debido a que la relación anticoagulante es pequeña (anticoagulante: sangre completa = 1: 9), la sangre tiene una cierta dilución y generalmente no se recomienda.

Precauciones para elegir la anticoagulación:

1. La cantidad de anticoagulante agregado en cada muestra debe ser la misma, y ​​la cantidad de sangre completa recolectada debe ser lo más consistente posible.

2. Asegúrese de revertir toda la sangre anticoagulada suavemente. Anicoagulación completa, para evitar que parte de la sangre se contacte con el anticoagulante y cause coagulación

3. Recolecte más plasma de sangre completa anticoagulante (0.4-0.5 ml de plasma se puede separar de 1 ml de sangre completa anticoagulante);

4. Después de que el plasma recolectado se congele y se almacena, la turbidez de la floculación puede ocurrir durante el proceso de descongelación, y puede centrifugarse para eliminar la turbidez para determinar si es necesario. Después de la recolección, el suero y el plasma no se determinan para ningún momento y se pueden almacenar de inmediato. Cuanto menor sea la temperatura, mejor. Si la temperatura no se repite en el medio, se puede almacenar por debajo de -20 ° C durante 1 mes y inferior a -70 ° C durante 3 meses.

Tres, la velocidad centrífuga utilizada para recolectar suero y plasma: al separar el suero o el plasma, de acuerdo con las diferentes especies, la velocidad centrífuga también es diferente, la velocidad centrífuga recomendada es: 1, ratones: generalmente 1000-1500 rpm, centrifugación para 8 -10 minutos; 2 ratas, conejos: generalmente 2000-2500 rpm, centrifugación durante 8-10 minutos; 3, Gente: General 2500-3000 RPM, Centrifugación durante 8-10 minutos. Cuarto, el efecto de los altos factores de lípidos y hemolíticos:

Impacto de la hemólisis: el impacto de la hemólisis en algunos de los indicadores probados depende no solo del método utilizado, sino también del instrumento analítico utilizado. El método de medición de longitud de onda dual puede eliminar la interferencia de color de la hemoglobina hasta cierto punto, pero no puede eliminar por completo la interferencia de la hemoglobina, especialmente cuando la hemoglobina reacciona con el reactivo utilizado. En general, la hemólisis leve no interfirió significativamente con la determinación de la mayoría de los indicadores de química clínica.

La hemólisis severa puede tener dos efectos: (1) Cuando la concentración del componente probado es mayor en PBC que en el plasma, los resultados del ensayo son más altos; (2) Cuando la concentración de la fracción probada en RBC fue menor que el efecto plasmático, la fracción probada se diluyó ligeramente.